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慢性乙肝患者持续感染探明

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日期:2006-12-12 来源:景天阁·健康资讯
内容提示:实验所用血清采自南宁市各大医院住院的59例慢性肝炎患者,其中男47例,女12例,年龄在16~57岁。套式PCR结果显示,59例慢性乙型肝炎患者35例HBVDNA阳性,阳性率为59。16例HBeAg阳性患者HBVDNA阳性,阳性率57。1%(16/28),19例HBeAg阴性患者HBVDNA阳性,阳性率61。

课题以了解HBV核心基因启动子突变与肝损害程度或HBeAg状态的关系为研究目的。实验所用血清采自南宁市各大医院住院的59例慢性肝炎患者,其中男47例,女12例,年龄在16~57岁。HBeAg阳性28例、阴性31例。pCR试剂购自美国克隆技术实验室,DNA纯化试剂购自美国promega公司,循环测序试剂盒购自美国USB公司。DNA提取按酚/氯访/异戊醇(25/24/1)常规法抽提;DNA扩增:做套式pCR,每轮扩增反应条件相同:热启动94℃5分钟,然后94℃30秒,55℃30秒,72℃1.5分钟。30个循环后继续循环:72℃10分钟,22℃5分钟;用直接测序法对DNA进行序列测定。

套式pCR结果显示,59例慢性乙型肝炎患者35例HBVDNA阳性,阳性率为59.3%。16例HBeAg阳性患者HBVDNA阳性,阳性率57.1%(16/28),19例HBeAg阴性患者HBVDNA阳性,阳性率61.3%(19/31)。BCp序列测定结果显示,无正常序列标本,最常见的突变类型是nt1762、1764发生双突(A→T、G→A),占57.1%(20/35);其次的突变类型有nt1799位点突变,由C→G,占54.4%(19/35),为无义突变;nt1752位点突变,由A→G,使该密码由异亮氨酸变为缬氨酸,占37.1%(13/35);nt1753T→C,占20.0%(7/35)。

核心抗原与e抗原有部份相同的序列,这部份序列可被宿主细胞毒性T淋巴细胞识别,核心多肽的改变可经免疫攻击导致慢性肝疾病。研究结果显示每份标本在Enh2/Cp区均有硷基突变,最常见的突变是nt1762、1764发生双突(A→T、G→A),次常见的突变有nt1799位点突变,由C→G,为无义突变;nt1752位点突变,由A→G,使该密码由异亮氨酸变为缬氨酸,nt1753T→C。核心基因启动子突变使乙型肝炎病毒(HBV)能够在体内持续感染,这些突变与慢性活动性肝炎有关。

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