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锤头状核酶降低小鼠胰岛细胞经CD95途径的凋亡

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日期:2006-11-26 来源:景天阁·健康资讯
内容提示:366-3697(武汉)为了研究锤头状核酶通过调控CD95的表达,对小鼠胰岛细胞凋亡的影响,探索提高胰岛移植物存活率的新途径,研究者体外构建针对CD95mRNA93位点的锤头状核酶(pU6-Rz93...

2005年12月15日中华器官移植杂志2005Vol.26No.6p.366-3697 (武汉)为了研究锤头状核酶通过调控CD95的表达,对小鼠胰岛细胞凋亡的影响,探索提高胰岛移植物存活率的新途径,研究者体外构建针对CD95mRNA93位点的锤头状核酶(pU6-Rz93)和突变型核酶(pU6-dRz93)。采用Ⅴ型胶原酶消化法分离小鼠胰岛细胞,通过干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素1α(IL-1α)诱导其高表达CD95后,经钠米载体-Effectene将核酶转染至该细胞。通过逆转录-聚合酶链反应(RT-pCR)和免疫印迹检测(Westernblot)法检测胰岛细胞CD95的表达。胰岛细胞经抗CD95的抗体(JO2)作用后,以Caspase-3活性检测试剂盒检测转染前后细胞Caspase-3活性的变化;MTT法测细胞的增殖;Annexin-Ⅴ凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,并观察了各组细胞对细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤的反应能力。结果细胞因子可诱导小鼠胰岛细胞高表达CD95分子。转染pU6-Rz93组的胰岛细胞CD95的表达与转染空载体组和转染pU6-dRz93组相比,明显下降。经JO2处理后,转染pU6-Rz93组胰岛细胞的Caspase-3活性和凋亡率明显降低,细胞增殖活性和抵抗CTL杀伤的能力显著增强。可见针对FasmRNA93位点的锤头状核酶能显著抑制小鼠胰岛细胞CD95的表达,使其免于CD95途径的凋亡,为提高胰岛移植物的存活率提供了实验基础。

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