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大肠癌CD44v6表达及其与肿瘤转移、细胞倍性的关系

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日期:2006-11-22 来源:景天阁·健康资讯
内容提示:为了了解CD44v6-细胞增殖/分化-细胞倍性三者之间的关系,探索CD44v6在肿瘤发生发展及肿瘤转移中的作用机理,我们进行了以下研究,现将结果报道如下。其中正常对照组9例(包括癌旁正常组织7例,正常人外周血淋巴细胞2例)。大肠癌标本26例,其中未转移组(Duke′sA/B期)17例,转移组(Duke′sC/D期)9例。按肿瘤细胞分化程度...

为了了解CD44v6-细胞增殖/分化-细胞倍性三者之间的关系,探索CD44v6在肿瘤发生发展及肿瘤转移中的作用机理,我们进行了以下研究,现将结果报道如下。

一、材料与方法

1.标本来源及处理39例标本中女性23例,男性16例,年龄24~88岁,由瑞金医院外科提供。其中正常对照组9例(包括癌旁正常组织7例,正常人外周血淋巴细胞2例);大肠腺瘤4例;大肠癌标本26例,其中未转移组(Duke′sA/B期)17例,转移组(Duke′sC/D期)9例。按肿瘤细胞分化程度分:Ⅰ级1例,Ⅱ级23例,Ⅲ级2例;按病理类型分类:增生型10例,溃疡型12例,浸润型4例。取2cm×2cm大小的新鲜肿瘤块,参照文献用胶原酶消化法收集肿瘤细胞。将细胞分成二部分,一部分抽提RNA,另一部分(约3×105个细胞)按文献[2]处理。正常人外周血淋巴细胞用Ficoll分离得到。正常大肠粘膜对照取自远离癌组织的大肠。

2.方法应用流式细胞仪Facscan测定DNA含量及肿瘤细胞在细胞周期各相中的分布。具体方法参照文献[2]进行。采用lifetechnologies公司TRIzolReagent抽提RNA;采用SuperScriptTM试剂盒oligo(dT)12-18引物合成第一链cDNA。具体步骤见试剂盒说明书。根据文献设计CD44分子pCR扩增引物及扩增条件。根据文献设计探针S1和D3,探针S1与标准型CD44分子结合,可确定细胞是否表达标准型CD44,探针D3(CD44v6)与CD44v6结合,可确定细胞是否表达CD44v6(或D3)。上述CD44扩增产物经电泳、转移、预杂交、杂交(同一张膜分别与D3、S1探针杂交)等过程,采用化学发光反应使X光片暴光,根据X光片上的条带有无,判断CD44s标准型及CD44v6的表达情况,此为定性结果。采用德国Kaiser公司的图像分析系统对X光片进行辉度扫描,包括图像输入、图像增强、图像分割、图像模式识别及数据分析等步骤,最后用数值表示X光片上条带的辉度值。

二、结果

正常对照组、腺瘤、未转移组及转移组CD44v6阳性率分别为0%(0/9)、25.0%(1/4)、64.7%(11/17)、88.9%(8/9),呈逐渐升高之势。将正常对照组、腺瘤、未转移组及转移组4个实验组杂交条带进行辉度扫描定量分析,其辉度均值分别为:(175.87±43.16)、(2017.31±1429.9)、(2039.88±1568.78)、(10004.47±8013.36),可见肿瘤转移组的CD44v6表达量比未转移组显著增加,二者差异有显著性(p<0.05)。19例CD44v6阳性的标本中,其G2M期的细胞占全部细胞百分率的均值为6.74%,7例CD44v6阴性的标本中,其G2M期的细胞占全部细胞百分率的均值为5.57%。二者经统计学处理,差异无显著性(p>0.05)。CD44v6阳性的19例标本中,细胞分化程度为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的标本数分别为1、17、1例;CD44v6阴性的7例标本中,细胞分化程度为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级的标本数分别为0、6、1例。二者经统计学处理,,差异无显著性(p>0.05),说明CD44v6表达与肿瘤细胞分化程度无关。26例肿瘤标本中,二倍体10例,其中1例发生转移,占10.0%;异倍体细胞16例,其中8例发生转移,占50.0%,二者经统计学处理,差异有显著性(p<0.05;χ2=4.35)。CD44v6阳性的19例标本中,二倍体6例,异倍体13例,异倍体细胞占68.42%;CD44v6阴性的7例标本中,二倍体4例,异倍体3例,异倍体细胞占42.86%。二者经统计学处理,差异无显著性(p>0.10;χ2=1.42)。

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