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兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳的制备以及在大肠肿瘤筛检中的应用

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日期:2006-11-22 来源:景天阁·健康资讯
内容提示:研究兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳对大肠肿瘤普查的临床意义。方法:应用致敏羧化胶乳的方法制备了兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳试剂。用反向胶乳凝集试验检测经结肠镜检出和病理证实的269例大肠肿瘤和结肠炎患者以及161例正常人的粪微量白蛋白。检测牛、马、羊、豚鼠等动物血清呈阴性反应。

研究兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳对大肠肿瘤普查的临床意义。方法:应用致敏羧化胶乳的方法制备了兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳试剂。用反向胶乳凝集试验检测经结肠镜检出和病理证实的269例大肠肿瘤和结肠炎患者以及161例正常人的粪微量白蛋白。结果:该试剂灵敏性高(3.125ng/ml);检测牛、马、羊、豚鼠等动物血清呈阴性反应;用多批次免疫羧化胶乳平行检测并在有效期内重复检测已知阳性标本,其重复性良好。结论:该试剂对大肠癌的诊断敏感性76.8%,特异性80.0%,准确性77.0%。

关键词:免疫羧化胶乳反向胶乳凝集试验大肠肿瘤粪微量白蛋白

1956年,Singer和plotz首次报道以胶乳颗粒为载体吸附IgG,胶乳吸附抗体检测相应抗原的方法称为反向胶乳凝集试验,对206例大肠肿瘤、63例结肠炎患者和161例正常人粪微量白蛋白进行了检测。

1材料与方法

1.1兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳的制备

1.1.1兔抗人白蛋白抗体的制备采用25%人血浆白蛋白注射液,按常规免疫新西兰纯种白兔,获得兔抗人白蛋白免疫血清(效价1:32),经饱和硫酸铵沉淀后,过DE-52层析柱,IgG峰部洗脱液用Follin酚法于540nm处定量测定IgG蛋白含量,并用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳鉴定,仅出现一条区带。

1.1.2兔抗人白蛋白免疫羧化胶乳的制备取10%羧化聚苯乙烯胶乳悬液(军事医学科学院动物中心产品,Φ=0.6μm),用pH8.2甘氨酸缓冲液(GBS)稀释成1%浓度,将其于兔抗人白蛋白IgG按适当比例混合,以常规物理吸附法致敏胶乳[2]。

1.2敏感性试验

取25%人血浆白蛋白20μl,加入生理盐水180μl,再经系列稀释成10个浓度,其浓度范围在25mg/ml~3.125ng/ml之间,用兔抗人免疫羧化胶乳做3次重复检测。

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