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大肠癌人乳头瘤病毒感染与p53基因突变的关系

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日期:2006-11-22 来源:景天阁·健康资讯
内容提示:我们采用PCR、PCR-SSCP技术,对大肠癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)感染与p53基因突变进行分析,旨在探讨大肠癌发生与HPV感染和p53基因突变的关系,现报道如下。 标本我院1996年~1997年经手术切除大肠癌病人50例。 组织中DNA的提取采用裂解液消化后,用酚-氯仿抽提DNA,无水乙醇沉淀,体积分数为75%乙醇洗涤,凉干,以三蒸水...

我们采用pCR、pCR-SSCp技术,对大肠癌组织中人乳头瘤病毒(HpV)感染与p53基因突变进行分析,旨在探讨大肠癌发生与HpV感染和p53基因突变的关系,现报道如下。

一、对象与方法

1.标本我院1996年~1997年经手术切除大肠癌病人50例。术中切取新鲜癌灶标本立即置入液氮中贮存。术后均经病理组织学证实。高分化腺癌8例,中分化腺癌21例,低分化腺癌12例,粘液腺癌9例。

2.组织中DNA的提取采用裂解液消化后,用酚-氯仿抽提DNA,无水乙醇沉淀,体积分数为75%乙醇洗涤,凉干,以三蒸水溶解DNA。

3.HpV检测HpV反应体系,25μl反应体系中含DNA模板5μl,pCR反应液20μl,Taq酶1U。引物:HpV16、18晚期区共同引物,扩增片段为449bp。HpV16、18早期区特异引物,扩增片段分别为203bp,244bp。以上引物均由(北医大病理分子生物学实验室合成)。pCR反应:94℃/45″、55℃/1′、72℃/1′,共35个循环。以电泳观察:制备1.2%琼脂糖凝胶,电泳后于紫外光透射下观察相应条带。

4.p53基因pCR-SSCp分析:反应体系同上。引物:p53基因第5、6、7、8、9外显子引物,(均由京师生物工程技术公司合成)其扩增片段分别为181bp、201bp、171bp、204bp、185bp。pCR反应:第5、6、7、8外显子为94℃/45″、56℃/45″、72℃/45″、第9外显子火温度为46℃/45″。共35个循环。SSCp检测:取10μlpCR产物,经热变性后上样于8%聚丙烯酰胺凝胶,垂直电泳,银染、显色后观察,出现异常条带者即为有突变。

二、结果

1.50例标本中,检出有HpV16、18DNA相关序列者26例占52%,其中HpV16DNA4占例8.0%,HpV18

DNA22例占44.0%。两者检出率差异有非常显著性(p<0.01)。

2.50例标本中,共检出有p53基因突变者28例,占56.0%。其中第5外显子突变3例,第6外显子突变4例,第7外显子突变6例,第8外显子突变13例,第9外显子突变2例。第8外显子突变率较高(p<0.05)。

3.在26例HpV18、16DNA检测阳性者中,出现p53基因突变者19例,占73.1%。而在HpV18、16DNA阴性的24例中,有p53基因突变者9例,占37.5%。两组中p53基因突变率差异有显著性(p<0.05)。

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