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散发性大肠癌微卫星不稳定及hMSH2基因突变研究

正文字体:  
日期:2006-11-22 来源:景天阁·健康资讯
内容提示:了解散发性大肠癌微卫星不稳定及其hMSH2基因突变情况。方法用6个微卫星位点标记,PCR法检测微卫星不稳定性(microsatelliteinstability,MI),银染PCR-SSCP法检测hMSH2基因5、7、8、12、13、15外显子突变。结果60例大肠癌中,微卫星改变总的发生率为50%(30/60)。33%)表现微卫星不稳定性,其中4例同时有杂合性缺失(losso...

了解散发性大肠癌微卫星不稳定及其hMSH2基因突变情况。方法用6个微卫星位点标记,pCR法检测微卫星不稳定性(microsatelliteinstability,MI),银染pCR-SSCp法检测hMSH2基因5、7、8、12、13、15外显子突变。结果60例大肠癌中,微卫星改变总的发生率为50%(30/60);20例(33.33%)表现微卫星不稳定性,其中4例同时有杂合性缺失(lossofheterozygosity,LOH),DNA复制错误(RER)阳性11例(18.33%);14例(23.3%)检测到LOH。8例微卫星不稳定性大肠癌组织检测到第5外显子杂合性突变,而未发现胚系突变。结论散发性大肠癌中微卫星不稳定是一个常见的分子事件,与hMSH2基因胚系突变无关,可能为体细胞性突变或/和缺失所致。

StudyonmicrosatelliteinstabilityandhMSH2genemutationinsporadiccolorectalcancer

XIONGBin,ZHENGShu,CAIXinhan.

CancerInstitute,DepartmentofGeneralSurgery,TheSecondAffiliatedHospitalofHubeiMedicalUniversity,Wuhan430071

【Abstract】ObjectiveTostudythemicrosatelliteinstability(MI)andhMSH2genemutationinsporadiccolorectalcancer.MethodMIwasdetectedbyusingD2S123,D2S119,D13S160,D8S282,D3S1293andD18S58microsatellitemarkers.SilverstainingpCR-SSCpmethodwasusedtodetectmutationofhMSH2geneexons5,7,8,12,13,15intheMIcases.ResultsAmongthe60cases,33.3%ofthecasesshowedMI,18.3%ofthecasesRERpositive,23.3%ofthecaseslossofheterozygosity.hMSH2-somaticheterozygositymutationwasfoundontheexon5insporadiccolorectalcancertissuesin8MIcases.ConclosionsMIphenotypemightbepresentubiquitouslyinsporadiccolorectalcancerinChina.Itspositiveratiowasconsistentwiththatofotherreports.Germ-linemutationofhMSH2wasnotrelatedwiththeoccurrenceofMIinsporadiccolorectalcancer.ThesporadiccolorectalcancerwithMImighthavealterationsofunknowngenesrelatedtothemismatchrepairsystem.

【Keywords】MicrosatelliteinstabilityColorectalcancerhMSH2GeneMutation

我们对60例散发性大肠癌组织的微卫星不稳定性进行研究,结合临床病理资料,探讨其临床意义,并研究微卫星不稳定性散发大肠癌hMSH2突变。

材料和方法

1、标本收集和基因组DNA提取经病理证实的大肠癌60例,其中男37例,女23例,年龄32~78岁,平均56岁。标本随机取自浙江医科大学附二医院1996年3月~1997年5月间的手术新鲜组织,基因组DNA提取采用蛋白酶K消化,酚-氯仿抽提法。

2、微卫星不稳定性检测选用D2S119、D13S160、D8S282、D3S1293、D2S123和D18S58六个微卫星位点进行检测。pCR反应体系为50mmol/LKCl,10mmol/LTris-Cl,0.1%TritoX-100,1.5mmol/LMgCl2,200μmol/LdNTpS,模板DNA200ng,上下游引物各50pmol,Taq酶1U,加去离子水至50μl。pCR反应参数为:94℃变性5分钟,然后进入35个循环(94℃45秒,退火温度30秒,72℃1分钟),最后70℃延伸10分钟,4℃保存。pCR产物用8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,电泳结束后进行银染。

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